在生命科学的科研领域，准确测量人卵泡抑素（FS）的浓度对于深入研究相关生理和病理机制至关重要。人卵泡抑素（FS）试剂盒（ELISA）为我们提供了一种可靠的定量检测方法，能对血清、血浆、细胞培养上清液等样本中的 FS 浓度进行精准测定。
一、产品基础信息
这款试剂盒货号为 RX105481H，有 48T 和 96T 两种规格可供选择。其检测范围设定在 0.375 - 12 ng/mL，具有高度特异性，对结构类似物无交叉反应，灵敏度小于 0.1 ng/mL。在重复性方面表现优异，板内变异系数均小于 10%，板间变异系数均小于 15%。需在 2 - 8℃的环境下保存，有效期为 6 个月。
二、实验原理剖析
本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）实现对 FS 的精准检测。预包被抗人卵泡抑素（FS）抗体（固相抗体）的微孔酶标板，如同一个精心搭建的 “反应舞台”。当我们加入人卵泡抑素（FS）校准品和待测样本后，再加入 HRP 标记的抗人卵泡抑素（FS）抗体（酶标抗体）。经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体 - 抗原 - 酶标抗体的夹心复合物。随后加入底物 A 和 B，在 HRP 的催化下，底物发生化学反应产生蓝色产物，再加入终止液（2M 硫酸），蓝色产物迅速转化为黄色。通过酶标仪在 450nm 波长上测定吸光度（OD 值），该 OD 值与待测样品中人卵泡抑素（FS）的浓度呈正相关关系。通过拟合校准品曲线，即可计算出样本中人卵泡抑素（FS）的浓度。
三、使用规则须知
用途限定：本试剂盒仅用于科研，切勿用于临床诊断。
有效期使用：严格在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品切勿使用，以免影响检测结果的准确性。
避免混用：请勿将本试剂盒与其他厂家的试剂盒或组分混合使用，以免干扰检测过程，导致结果不可靠。
样品稀释：使用试剂盒配套的样品稀释液进行样品稀释，以确保检测结果的准确性和可靠性。
高浓度样本处理：若样本值高于最高标准品浓度值，需将样本适当稀释后再重新测定。
排除干扰因素：检测前需排除待测样本中可能存在的人抗鼠等异嗜抗体的干扰，以获得准确的检测结果。
结果不可比性：通过其他方法得到的检测结果与本试剂盒的测定结果不具有直接可比性，应专注于本试剂盒的检测方法和结果分析。
四、技术操作要点
防止气泡产生：混合蛋白溶液时要格外小心，避免产生气泡，以免影响实验结果。
避免交叉污染：加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分采用悬臂加样的方式，有效防止交叉污染。
控制温育和洗涤：严格控制温育时间，确保充分洗涤，这是保证实验结果准确性的必要条件。
优化洗板操作：使用自动洗板机时，加入一个 30 秒浸泡的步骤，可显著提高洗板效果和检测精度。
判断底物状态：底物溶液正常应为无色液体，若在保存过程中变为蓝色，表明底物溶液已失效，不可再使用。
正确添加终止液：终止液加样顺序要与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物应瞬间变为黄色。
保存剩余板条：实验中用剩的板条，应立即放回自封袋中密封，放置在低温干燥的环境下保存，以备下次使用。
摇匀液体组分：所有液体组分在使用前都要充分摇匀，并严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
五、实验仪器与用品
为顺利完成实验，需准备以下仪器和用品：
酶标仪（450nm）：用于准确测量吸光度，获取实验关键数据。
精密移液器及一次性吸头：精确控制加样量，避免交叉污染。
蒸馏水：用于稀释试剂，保证实验的纯净性。
洗瓶或者自动洗板机：负责清洗反应孔，去除残留杂质。
37℃水浴锅或恒温箱：为实验提供适宜的温育温度。
500ml 量筒：用于准确量取试剂体积。
六、试剂盒组分与保存
校准品：0.3ml / 管，提供不同浓度的标准品，用于绘制标准曲线，开封后在 2 - 8℃可保存 14 天。
包被微孔板：有 96T 和 48T 两种规格，预包被固相抗体，开封后 2 - 8℃保存 14 天。
HRP 标记抗体：10mL，为 HRP 标记的检测抗体，开封后 2 - 8℃保存 180 天。
样本稀释液：6mL，用于稀释样本，开封后 2 - 8℃保存 180 天。
底物液 A：6mL，主要成分是 0.01% 过氧化氢，开封后 2 - 8℃保存 180 天。
底物液 B：6mL，含有 0.1% TMB，开封后 2 - 8℃保存 180 天。
终止液：6mL，2mol/L 稀硫酸，开封后 2 - 8℃保存 180 天，使用时需注意其具有轻微腐蚀性，避免接触衣物或皮肤。
20× 浓缩洗涤液：25mL，含 0.05% Tween20，开封后 2 - 8℃保存 180 天。
说明书：1 份，为实验操作提供详细指导。
自封袋：1 个，用于保存未使用完的板条。
不干胶：2 片，可用于标记或密封等操作。
校准品浓度依次为 12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL。再次使用试剂盒组分时，需确保上一次使用后未被污染；酶标板单次未使用完，应密封后置于 2 - 8℃保存。
七、生物安全注意事项
遵守规范防污染：检测过程必须符合实验室管理规范，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和废弃物都应按传染物进行处置。
避免接触防腐剂：试剂盒的液体组分中含有 proclin - 300 防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，操作时应避免吸入烟雾，避免与皮肤接触。
防范底物液刺激：底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，操作时要避免吸入烟雾，若不慎接触，应立即用大量清水冲洗，必要时寻求医疗帮助。
做好个人防护：实验过程中应全程佩戴防护手套，实验完成后彻底洗手，养成良好的实验习惯。
八、样本采集与储存
细胞培养上清：在 4000rpm 条件下离心 20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在 - 20℃以下，避免反复冻融。
血清：使用不含热原和内毒素的试管采集血液，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm 条件下离心 20min，分离出血清后保存在 - 20℃以下，避免反复冻融。
血浆：选用肝素、EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，在 4000rpm 条件下离心 20 分钟取上清，血浆保存在 - 20℃以下，避免反复冻融。
组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M, pH = 7.4) 冲洗组织，去除残留血液，称重后剪碎组织。按 1:9 的重量体积比（可根据实验需要调整并记录，推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂），将剪碎的组织与 PBS 加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液在 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。
细胞提取液：贴壁细胞用冷的 PBS 轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS 洗涤 3 次，每 1×10⁶ 个细胞中加入 150 - 200μL PBS 重悬，通过反复冻融使细胞破碎（若含量很低可减少 PBS 的体积）。将提取液于 1500×g 离心 10 分钟，取上清检测。
其他生物体液：1000×g 离心 20 分钟，除去杂质及细胞碎片，取上清检测。
样本在 2 - 8℃可储存 72h，在 - 20℃可储存 6 个月。若样本收集后不能一次检测完毕，应按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
九、试剂准备与操作程序
试剂准备
充分复温：使用前，样本和试剂盒所有的组分都要至少复温 120min，确保充分复温到室温。
处理浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液可能有结晶，这属正常现象。通过水浴加热使结晶完全溶解，然后将浓缩洗涤液与蒸馏水按 1:20 稀释。
混合底物：底物液 A 和 B 在使用前，按 1:1 体积充分混合，混合后 15 分钟内使用。
操作程序
所有试剂和组分先恢复到室温，标准品、质控品和样品建议做复孔。
配制工作液：按说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
取出板条：从铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回冰箱。
设置反应孔：设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL，0 值孔加样本稀释液 50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本 50μL。
加入酶标抗体：除空白孔外，标准品孔、0 值孔和样本孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL。
温育反应：用封板膜盖住反应板，在 37℃水浴锅或恒温箱避光孵育 60min。
洗板操作：揭开封板膜，弃去液体，在吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20S，甩去洗涤液，再在吸水纸上拍干，如此重复 5 次。若使用自动洗板机，按洗板机操作程序进行洗板，并添加浸泡 30s 的程序，可提高检测精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
加入底物：将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反应板，在 37℃水浴锅或恒温箱避光孵育 15min。
读取数据：所有孔加入终止液 50μL，在酶标仪 450nm 波长上读取各孔吸光度（OD 值）。
十、结果计算与典型数据
结果计算
以标准品浓度为横坐标（6 个标准品孔，加 1 个 0 值孔，共 7 个浓度点），对应的吸光度（OD 值）为纵坐标，利用计算机软件，采用四参数 Logistic 曲线拟合（4 - pl），创建标准曲线方程。通过样本的吸光度（OD 值），利用方程计算出样品的浓度值。
若样品被稀释，通过上述方法测得的浓度值需乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。
典型数据
以下数据仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。浓度为 12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL 时，对应的 OD 值分别为 2.062、1.032、0.478、0.293、0.153、0.069。
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十一、试剂盒性能指标
物理性能：各液体组分应澄清透明、无沉淀或絮状物，微孔板铝箔袋应真空包装且无破损漏气。
剂量反应曲线线性：校准品剂量反应曲线相关系数 r 值大于等于 0.9900，表明剂量与反应呈高度线性关系。
精密度：批内精密度和批间精密度良好，三组不同浓度样品的变异系数均在合理范围内。
灵敏度：最低检出剂量小于 0.1 ng/mL（6 次独立实验的平均值）。
回收率：不同样本的回收率在 85% - 115% 之间，保证了检测结果的可靠性。
特异性：本试剂盒能准确识别天然和重组人卵泡抑素（FS），与结构类似物无交叉反应。
稀释线性：不同稀释倍数下，各样本有相应的回收率范围，体现了试剂盒在不同浓度样本检测中的适应性。
十二、重要说明与警告
质量技术风险：由于现有技术水平限制，对原料鉴定可能不全面，产品存在一定质量技术风险。
实验影响因素：实验结果受试剂有效性、操作及实验环境等多种因素影响，务必准备充足标本备份。
批次差异：不同批次产品可能有差异，以纸质说明书为准。
配套使用：本试剂盒配套试剂必须配套使用，不能混用其他制造商产品，严格遵守实验说明才能得到最佳结果。
重组蛋白检测：难以保证对其他公司重组蛋白的检测效果，一般不建议使用本试剂盒检测。
用途限定：本试剂盒仅用于科研，用于其他用途公司不承担任何责任。
危险提示：终止液稀硫酸有腐蚀性，使用时避免接触衣物、眼、手等部位。
十三、问题解答
标准曲线差：可能是试剂盒平衡时间不够、吸取及洗涤不充分、移液不精确、混匀不充分或吸取试剂不足、重复利用吸头容器和覆膜等原因。对应解决方法为保证不低于 2 小时的室温平衡、充分吸取洗涤、检查校正移液器、充分混匀吸取试剂、使用新的吸头和封板模等。
精密度低：可能是加样不精确、每孔试剂量不精确、温育时间或温度不正确、酶标记物或底物失效、未加入终止液等原因。解决方法包括检查校正移液器、精确加试剂、保证正确温育时间和温度、检查酶标物和底物、按步骤加入终止液等。
O.D 值低：可能是超出读数时间读数，应在说明书推荐的读数时间内读数。
样本值不正确：可能是样本储存方式不正确、收集和处理方法有误、待测物质含量低等原因。解决方法为正确储存样本、采用正确的收集处理方法、使用新鲜样本并重复实验。
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